ICS 65.020.20 B 05 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2023—2014 辣椒疫病抗性鉴定技术规范 The technical standard of resistance identification to phytophthora blight for pepper 2014 - 02 - 28 发布 吉林省质量技术监督局 2014 - 04 - 30 实施 发 布 DB22/T 2023—2014 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由吉林省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林农业大学。 本标准主要起草人：王晓梅、韩玉珠、张浩、马贵龙、王薇、赵欣欣、刘朴、王雪。 I DB22/T 2023—2014 椒疫病抗性鉴定技术规范 1 范围 本标准规定了辣椒疫病抗性鉴定接种体制备、接种方法、室内抗性鉴定、病情调查、抗病性评价以 及鉴定记载表格。 本标准适用于辣椒（Capsicum annuum L.）资源对疫病抗性的室内鉴定及评价。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 辣椒疫病 pepper phytophthora blight 由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici Leonian）所引起，主要为害根、茎、叶片和果实，病叶病 斑圆形或近圆形，边缘黄绿色中央暗褐色，果实发病水渍状，暗绿色，潮湿时表面有白色霉层症状的辣 椒病害。参见附录A 2.2 抗病性 disease resistance 植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。 2.3 人工接种 artificial inoculation scale 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体适当部位并使之发病的过程。 2.4 接种体 inoculm 用于接种引起病害的病原物或病原物的一部分 2.5 接种悬浮液 inocululn suspension 用于接种的含有定量接种体的液体。 2.6 病情级别 disease rating 1 DB22/T 2023—2014 人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。 2.7 病情指数 disease index ( Dl ) 通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。 3 生产技术操作规程 3.1 培养基制备 燕麦培养基：将30 g燕麦片加入600 mL蒸馏水，加热至45 ℃～50 ℃，制成匀浆。再加入已溶化20 g琼脂的400 mL蒸馏水，高压灭菌（121 ℃，30 min）。 3.2 病原物分离 从发病植株叶片、茎基部或分枝处及病果的典型病斑上用常规组织分离法分离疫病病原物。分离物 经形态学鉴定确认为辣椒疫霉菌[phytophthora capsici Leonian]后，进行分离物纯化。 3.3 病原物致病性测定 在燕麦培养基上培养纯化的分离物，培养种菌接种于健康辣椒叶片或果实上，诱发产生辣椒疫病典 型症状，从接种发病部位分离获得辣椒疫霉菌，再纯化，显微观察、描述、记录孢囊梗和孢子囊形态特 征。 3.4 病原物保存 辣椒疫霉病菌接种于燕麦斜面培养基上，在25 ℃的恒温箱中培养7 d后，置4 ℃～8 ℃冰箱内保存； 或在斜面上加一层灭菌矿物油（超过斜面顶部1 cm），置冰箱或室温下保存。 3.5 接种体繁殖和制备 3.5.1 接种体繁殖 常用繁殖方法：将辣椒疫霉病菌接种在燕麦培养基上，于25 ℃下培养7 d，在28 ℃下日光灯照射 48 h诱发孢子囊。 3.5.2 接种悬浮液制备 培养基平板上产生大量孢子囊后加入无菌水，用玻棒或毛笔刮动平板培养基表面收集菌丝和孢子 囊。收集的培养物置于5 ℃下30 min，置于室温（20 ℃～24 ℃）下3 h诱发游动孢子的形成和释放。 两层纱布过滤后得孢子悬浮母液，并用血球计数板镜检配至所需接种浓度。 4 室内抗病性鉴定 4.1 鉴定室 人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。 4.2 鉴定设计 2 DB22/T 2023—2014 鉴定材料随机排列或顺序排列，重复3次，每一处理10株苗。 4.3 鉴定对照材料 设高抗品种为抗病对照品种，设当地易感病品种为感病对照品种。 4.4 鉴定材料育苗 4.4.1 种子消毒 鉴定种子在l0％的次氯酸钠溶液中浸种5 min～l0 min，清水冲洗后置于恒温培养箱中28 ℃催芽， 播种于育苗钵内。 4.4.2 育苗基质 育苗基质为草炭：蛭石：菜田土=2：1：1，经134 ℃高温蒸汽灭菌30 min。 4.4.3 育苗 在日光温室里育苗，室内温度为20 ℃～25 ℃，每钵1苗。 4.5 接种 4.5.1 接种时期 辣椒幼苗6～7叶期接种。 4.5.2 接种体浓度 3 5×10 个孢子囊/mL。 4.5.3 接种方法 采用喷雾接种法。用小型手持喷雾器将接种液均匀地喷于辣椒叶片正、反两面欲下滴为止。 4.5.4 接种后管理 将植株置于25 ℃～28 ℃的鉴定室内，夜间温度不低于15 ℃，每日光照10 h～12 h，适时浇水， 保持空气相对湿度80%～100%。 5 病情调查 5.1 调查时间 接种后7 d～8 d调查病情。 5.2 病情级别划分 病情级别划分见表1。 3 DB22/T 2023—2014 表1 辣椒疫病抗性室内鉴定病情级别的划分 病情级别 症状描述 0 无症状 1 病斑面积占叶面积的 1/3 以下，白霉状病斑模糊不清 2 病斑面积占叶面积的 1/3～2/3，白霉状病斑较为明显，分散不连片 3 病斑面积占叶面积的 2/3 以上，白霉状病斑连片，叶片开始变黄白 4 病斑面积占叶面积的 2/3 以上，霉层浓厚，由叶缘向里变褐 5 叶片变褐坏死斑面积占叶面积的 2/3 以上，叶缘上卷 5.3 调查方法 按幼苗病情级别划分调查接种株发病情况，记载单株病情级别，计算病情指数（DI）。 病情指数按公式（1）计算： DI = å ( s ´ n) ´ 100 ................................... (1) N´S 式中： DI—病情指数 s ― 各病情级别代表数值； n ― 各病情级别病株（叶）数； N 一 调查总株（叶）数； S ― 最高病情级别代表值。 注：计算结果精确到小数点后两位。 6 抗病性评价 6.1 抗病性评价标准 依据鉴定材料3次重复病情指数（DI）的平均值确定其抗性水平，划分标准见表2。 表2 辣椒疫病抗性的评价标准 病情指数（DI） 抗性评价 DI =0 免疫（I） 0＜DI≤10 高抗（HR） 10＜DI≤30 抗病（R） 30＜DI≤50 中抗（MR） 50＜DI≤70 感病（S） DI＞70 高感（HS） 6.2 鉴定有效性判别 感病对照材料达到其相应感病程度（DI >50），该批次疫病抗性鉴定视为有效。 4 DB22/T 2023—2014 7 鉴定记载表格 辣椒疫病抗性鉴定结果记载表格见表3。 表3 辣椒疫病抗性鉴定结果记载表 编 号 品种/种质 名 称 来 源 重复 区号 病 情 级 别 0 1 2 3 4 5 病情 平均 抗性 指数 病指 评价 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 播种日期 接种日期 接种生育期 调查日期 鉴定技术负责人（签字）： 5 DB22/T 2023—2014 AA 附 录 A （资料性附录） 辣椒疫病病原菌的相关资料 A.1 分类地位 辣椒疫病病原菌（Phytophthora capsici Leonian）属管毛生物界(Stramenopila)，卵菌门 （Oomycota），卵菌纲（Oomycetes），霜霉目（Peronosporales），腐霉科（Pythiaceae），疫霉属（Phytophthora De Bary）。 A.2 形态描述 菌丝无隔膜，丝状，有分枝，偶尔呈瘤状或结节状膨大，寄生于寄主细胞间或细胞内，菌丝直径为 5 μm～7 μm。无性繁殖形成不分枝或单轴分支的孢囊梗，无色，丝状，顶生孢子囊。孢子囊卵圆形， 长圆形或扁圆形，无色单胞，顶端乳头状凸起明显，偶有双乳突。孢子囊大小（21～51）μm×（22～ 34）μm，孢子囊成熟脱落具长柄，平均柄长 6.6 μm。孢子囊在植株病果上或蒸馏水水培时易形成， 在固体培养基上 23 ℃～28 ℃培养 10 d～15 d 后也可形成。在油菜琼脂培养基上也可形成大量孢子囊。 藏卵器球形，淡黄色至金黄色，直径 15.5 μm～28.9 μm，雄器围生，扁球形，直径 14.4 μm～ 16.7 μm。卵孢子球形，浅黄色至金黄色，直径 15 μm～28 μm。厚垣孢子球形，单胞，黄色，壁平 滑。病菌生长发育温度 10 ℃～37 ℃，最适温度 28 ℃～32 ℃，致死温度 50 ℃ 5 min～10 min。 A.3 寄主范围 辣椒疫霉病菌可以侵染茄果类和其他种类，如辣椒（Capsicum annuum L.），茄子(Solanum melongena L.)，木瓜(Chaenomeles sinensis Koehne)，黄瓜(Cucumis sativus L.)，南瓜(Cucurbita moschata Duch.ex Poir.)，石竹(Dianthus chinensis L.)，胡椒(Piper nigrum L.)，豇豆(Vigna unguiculata (Linn.)Walp)，番茄（Lycopersicon esculentum M.）。此外，还可侵染葱蒜类蔬菜如洋葱（Allium cepa L.），菜豆属（Phaseolus）植物。 A.4 病害症状 症状：叶片发病多在边缘和叶柄连接处出现不规则暗绿色病斑，水渍状，边缘黄绿色，多雨高湿条 件下常造成叶片腐烂，干燥条件下病斑干枯破碎。茎基部和茎节分叉处发生成段暗绿色病斑，水渍状。 茎部多在近地面发病，病斑初期为暗绿色，水渍状，后出现环绕表皮扩展的暗褐色或黑褐色条斑，病部 易缢缩折倒，病部以上茎梗易凋萎死亡。果实受害多从蒂部开始，病斑暗绿色水渍状软腐，边缘不明显， 扩展到全果实，引起腐烂，潮湿时病部覆盖白色霉层，干燥后形成暗褐色僵果。 A.5 传播途径 辣椒疫霉病菌主要借助雨水和灌溉水、气流传播扩散。 6 DB22/T 2023—2014 A.6 辣椒疫霉病发生规律 A.6.1 侵染循环 病菌主要以卵孢子和厚垣孢子在土壤中或残留在地上的病残体内越冬，为主要的初侵染来源。条件 合适萌发并侵染植物的根系或地下部分，产生游动孢子囊，释放游动孢子，经雨水