ICS 65.020 B 15 DB11 DB11/T 1432—2017 北 京 市 地 方 标 准 DB11/T 1432—2017 生物防治产品应用技术规程 舞毒蛾核型多角体病毒 Technical regulations for applying of biocontrol production Lymantria dispar L. nuclear polyhedrosis virus 2017 - 06 - 29 发布 北 京 市 质 量 技 术1 监 督 局 2017 - 10 - 01 实施 发 布 DB11/T 1432—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由北京市园林绿化局提出并归口。 本标准由北京市园林绿化局组织实施。 本标准起草单位：北京市西山试验林场。 本标准主要起草人：梁洪柱、陈倩、宁少华、赵洪林、赵京芬、张宝增、安玉涛、蒋薇、成新新、 李学燕、张博、焦进卫。 I DB11/T 1432—2017 生物防治产品应用技术规程 舞毒蛾核型多角体病毒 1 范围 本标准规定了舞毒蛾亚洲亚种核型多角体病毒（Lymantria dispar asiatica Vnukovskij Nuclear Polyhedrosis Virus，简称LdNPV）制剂的制备和应用、防治效果调查等技术内容。 本标准适用于北京地区利用舞毒蛾亚洲亚种幼虫的防治。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 舞毒蛾亚洲亚种 Lymantria dispar asiatica Vnukovskij 属鳞翅目（Lepidoptera）毒蛾科（Lymantriidae），是重要的森林害虫，其识别特征参见附录A。 北京地区为亚洲亚种，该虫以幼虫为害叶片，寄主可达500余种，危害多种林木、果树等，主要危害植 物种类参见附录B。 2.2 多角体 polyhedral inclusion body(PIB) 包埋病毒粒子的包涵体，用于表示病毒制备和应用过程中的计数。 2.3 舞毒蛾核型多角体病毒 Lymantria dispar asiatica Vnukovskij nuclear polyhedrosis virus 一种具有较高宿主特异性的昆虫病毒，属于杆状病毒科双环状DNA病毒，病毒粒子无规则地包埋在 多角体中。 2.4 标准枝法 branch sampling method 用于抽样调查舞毒蛾幼虫发生情况的一种方法。即低龄幼虫期，在树冠按上、中、下三个部位， 东、西、南、北、中五个方位，分别随机抽取50cm长的样枝1个，调查各样枝上舞毒蛾幼虫数量。 2.5 阻隔法 blocking method 利用4龄以上舞毒蛾幼虫具有上下树的特性，用塑料薄膜、塑料胶带缠绕树干胸径处从而阻隔幼虫 的方法，围环宽度不小于10cm。 3 LdNPV 制剂的制备和应用 3.1 LdNPV 制剂的制备 1 DB11/T 1432—2017 LdNPV 制剂的制备参见附录 C。 3.2 防治对象 舞毒蛾亚洲亚种幼虫。 3.3 防治适期 最佳防治龄期为 1～3 龄幼虫。在正常年份，3 月中旬舞毒蛾亚洲亚种幼虫陆续孵化，3 月中旬～4 月中旬为最佳防治时期；也可依据常见植物的物候期预测最佳防治时期，该虫 1～3 龄幼虫发生期与物 候关系参见附录 D。 3.4 使用剂量 2 12 防治 1～3 龄期幼虫，每 hm 用 1.5×10 PIB，即 1500mlLdNPV 制剂；防治 4 龄以上幼虫，用量加 2 12 倍，每 hm 用 3.0×10 PIB，即 3000mlLdNPV 制剂。 3.5 施用方法 使用时，用水稀释制剂，均匀喷洒到树叶上。具体施用方法见表 1。 表 1 舞毒蛾亚洲亚种核型多角体病毒制剂施用方式及施用浓度 喷雾类型 防治 1～3 龄幼虫 防治 4 龄以上幼虫 稀释倍数 稀释倍数 地面喷雾 1000 500 飞机喷雾 30 15 地面喷雾 100 50 飞机喷雾 10 4 地面喷雾 4 1.5 地面喷雾/飞机喷雾 常量喷雾 低量喷雾 超低容量喷雾 4 防治效果调查 4.1 调查指标 检查校正虫口减退率表示防治效果。校正虫口减退率越高，表示防治效果越好。 4.2 调查时间 制剂喷施前调查一次，喷施后第20d再调查一次。 4.3 调查方法 2 DB11/T 1432—2017 在幼虫发生期，针对舞毒蛾危害的树木进行调查，调查表参见附录E。选择有代表性的地块设立标 2 2 2 准地。标准地面积一般为0.2hm 。人工林每100hm 设立标准地1块，天然林每300hm 设立标准地1块。在 标准地内随机选取20株树为标准株，采用标准枝法和阻隔法调查防治前后的幼虫数量。 4.4 计算公式 虫口减退率、校正虫口减退率计算方法分别见公式（1）、（2）： 虫口减退率（%）= 防治前活虫数-防治后活虫数 ×100……………………………（1） 防治前活虫数 校正虫口减退率（%）= 防治区虫口减退率-对照区虫口减退率 …………………（2） 100-对照区虫口减退率 3 DB11/T 1432—2017 附 录 A （资料性附录） 舞毒蛾亚洲亚种的形态特征 A.1 卵 圆形，两侧稍扁，直径 1.3mm；初期杏黄色，以后转为褐色；数百粒到千余粒卵产在一起，成为 一卵块，上被黄褐色绒毛。 A.2 幼虫 1 龄幼虫头宽 0.5mm，体黑褐色，刚毛亦长，刚毛中间具有呈泡状扩大的毛，称为“风帆”，是减 轻身体重量易被风吹摇摆进行扩散的构造。2 龄幼虫头宽 1.0mm、黑色，体黑褐色，胴部显现出两块黄 色斑纹。3 龄幼虫头宽 1.8mm，头黑色，胴部花纹增多。4 龄幼虫头宽 2.9mm，头暗褐色，出现两条黑斑 纹。5 龄幼虫头宽 4.4mm，头黄褐色，两条黑斑纹更鲜明。老熟幼虫体长 50mm～70mm，头宽 6mm、黄褐 色，具“八”字形灰黑色条纹；背线灰黄色，亚背线、气门上线及气门下线部位各体节均有毛瘤，共 排成 6 纵列，背面两侧毛瘤上的刚毛短、黑褐色，气门下线一列毛瘤上的刚毛最长、灰褐色，背上两 列毛瘤色泽鲜艳，前 5 对为蓝色，后 7 对为红色。 A.3 蛹 体长 19mm～34mm。红褐色或黑褐色，被有锈黄色毛丛。 A.4 成虫 雌雄异型。雄蛾体长约 16 mm～21mm，翅展 37 mm～54mm；头部黄褐色，复眼黑色，下唇须向前 伸，第 2 节长，第 3 节短；后足胫节有 2 对距；前翅暗褐色或褐色，有深色锯齿状横线，中室中央有 1 个黑褐色点，横脉上有一弯曲形黑褐色纹，前、后翅反面黄褐色。雌蛾体长 22mm～30mm，翅展 58 mm～ 80mm 左右；前翅黄白色，横脉明显具有“<”形黑褐色斑纹一个，其他斑纹与雄蛾近似，前后翅外缘 每两脉间有 1 个黑褐色斑点；腹部肥大，末端着生黄褐色毛丛。 4 DB11/T 1432—2017 附 录 B （资料性附录） 北京地区舞毒蛾主要危害植物种类 北京地区舞毒蛾主要危害植物种类见表B.1 表 B.1 北京地区舞毒蛾主要危害植物种类（以拉丁学名为序） 寄主中文名称 复叶槭 寄主拉丁学名 Acer negundo L. 杏 Armeniaca vulgaris Lam. 白桦 Berula platyphylla Suk. 构树 Broussonetia papyifera Linn. 黄杨 Buxus sinica (Rehd.et Wils) Cheng ex M.Cheng 黄栌 Cotinus coggygria Scop. 山楂 Crataegus pinnatifida Bunge 柿 Diospyros kaki L.f. 银杏 Ginkgo biloba L. 核桃 Juglans regia L. 华北落叶松 苹果属 桑 Larix principis-rupprechtii Mayr Malus Mill. Morus alba L. 加杨 Populus X canadensis Moench 樱桃 Prunus pseudocerasus Lindl. 李 Prunus salicina Lindl. 榆叶梅 Prunus triloba Lindl. 枫杨 蒙古栎 Pterocarya stenoptera C. DC. Quercus mongolica Fisch. ex Ledeb 麻栎 Quercus acutissima Carruth. 柳属 Salix L. 蒙椴 Tilia mogolica Maxim. 榆属 Ulmus L. 5 DB11/T 1432—2017 附 录 C （资料性附录） 制剂制备 C.1 LdNPV的室内增殖 C.1.1 室内条件 温度 25℃，光照时间与黑暗时间比例为 14:10，光源为白炽灯。 C.1.2 饲料 为人工饲料。 C.1.3 饲养工具 透明塑料养虫杯，底直径3.5cm，顶直径5.0cm，杯高5cm。 C.1.4 增殖方法 在养虫杯内放入约 200 粒已消毒即将孵化的舞毒蛾卵粒，每 3d 更换一次新鲜饲料和养虫杯，并将 7 幼虫分至 40 头/杯， 待幼虫发育至 3 龄末时，开始喂饲带毒饲料， 将 1ml 浓度为 1.0×10 PIB/ml 的 LdNPV 液体倒入养虫杯内的人工饲料表面，阴干后待其取食，5d 后更换带毒饲料，及时清理养虫杯内虫粪， 防止虫体感染杂菌。待 80%幼虫死亡时，收集所有幼虫，-10℃长期贮存。 C.2 LdNPV的提纯 C.2.1 LdNPV的提取 将 C.1.4 中收集的幼虫加 2 倍无菌水稀释，在高速组织捣碎机上，粉碎 3min 后取出，先用三层纱 布初步过滤，然后再用 80 目筛子进一步过滤，滤液用 16000r/min 离心机离心 15min，滤液分为三层， 上层清液为水，弃之；中间浅褐色沉淀为病毒粗提物，保留；底部黑色沉淀为杂质，弃之。 C.2.2 粗提物的测定 取 1g 病毒粗提物稀释至 1000 倍，然后取 1ml 稀释液滴于血球计数板上，盖盖玻片，在显微镜 15 ×40 倍状态下计数，对角线取样，共取 80 小格，颗粒边缘不在同一小格内的不计，按公式 C.1 计算粗 11 提物内 PIB 含量。如果粗提物含量低于 1.0×10 PIB/ml，表明病毒粗提物中杂质含量过高，应加 2 倍 无菌水混匀，重新离心提纯，除杂质，直至含量合格。 每克 PIB 含量 = 平均每格颗粒体数×4000000×1000…………………………（C.1） 注：1000为稀