ICS 67.060 B 25 DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB 36/T 1027—2018 饲料中赭曲霉毒素 A 的快速筛查 胶体金快 速定量法 Screening of ochratoxin A in animal feeding stuffs——rapid quantitative method of colloidal gold technique 2018 - 03 - 19 发布 江西省质量技术监督局 2018 - 09 - 20 实施 发 布 DB36/T 1027—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 原理 .............................................................................. 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 1 6 样品制备与留存 .................................................................... 2 7 检测步骤 .......................................................................... 2 8 结果表述 .......................................................................... 3 9 重复性 ............................................................................ 3 附录 A（资料性附录） 胶体金快速定量检测条性能评价要求 ................................ 4 I DB36/T 1027—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由江西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：江西省兽药饲料监察所、中检环贸生物技术（北京）有限公司、中国农业科学院 北京畜牧研究所、双胞胎（集团）股份有限公司、江西正邦科技股份有限公司。 本标准主要起草人：杨琳芬、符金华、李瑾瑾、李华、张军民、饶正华、廖丰、刘四宁、徐国茂、 董泽民、刘国花、黄艳清、邢磊、尹腾桂。 II DB36/T 1027—2018 饲料中赭曲霉毒素 A 的快速筛查 胶体金快速定量法 1 范围 本标准规定了饲料中赭曲霉毒素A的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样 品制备与留存、检测步骤、结果表述和重复性。 本标准适用于饲料产品及饲料原料中赭曲霉毒素A的快速定量检测。检测限为2μg/kg ，检测范围为 2μg/kg～150μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 27404 实验室质量控制规范 食品理化检测 3 原理 样品提取液中赭曲霉毒素A与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与样品中赭曲霉毒素A 含量相关。用读数仪测定检测条的颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出样品中赭曲霉 毒素A的含量。 4 试剂和材料 4.1 试剂纯度 饲料中赭曲霉毒素A的快速筛查 胶体金快速定量法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T 6682二级 水的规定。 4.2 赭曲霉毒素 A 检测试纸条 符合附录A规定的技术要求，并按说明书要求保存。 4.3 稀释缓冲液 与胶体金检测条配套提供，或按照其说明书配制。 4.4 提取液 70%（v/v）甲醇溶液或胶体金检测条配套的提取液。 5 仪器和设备 1 DB36/T 1027—2018 5.1 天平 分度值0.01g。 5.2 粉碎机 样品粉碎后后全部通过0.85mm筛。 5.3 离心机 转速不低于4000r/min。 5.4 涡旋振荡器 转速不低于1500r/min。 5.5 孵育器 调节时间、温度,控温精度±1℃。 5.6 读数仪 可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。 6 样品制备与留存 6.1 样品制备 按GB/T 20195要求制备样品，取有代表性的样品至少500g，粉粹及粉碎至全部通过0.85mm筛，混匀。 6.2 样品留存 如需留样，样品应置于-10℃～-20℃下避光保存。 7 检测步骤 7.1 样品提取 准确称取10.00g试样于100mL具塞锥形瓶中，加入20.00mL试样提取液，密闭，用涡旋振荡器振荡 1min～2min，静置后用滤纸过滤，或取1.00mL～1.50mL混合液于离心管中，用离心机（4000r/min）离 心1min。取滤液或离心后上清液100μL于另一离心管中，加入1.00mL 稀释缓冲液，充分混匀待测。 7.2 样品测定 7.2.1 将孵育器预热至孵育温度 45℃。将检测条平放在孵育器凹槽中，打开加样槽。 7.2.2 准确移取 300μL 待测溶液，加入检测条加样孔中，关闭孵育器盖。 7.2.3 孵育 5min 后，取出检测条观察质控线和检测线显色情况，必须出现清晰齐整的质控线即 C 线。 若 C 线不出现或 T 线显色不清晰不均匀，视为检测条无效。 7.2.4 选取读数仪赭曲霉毒素 A 检测频道中“基质 00”（MATRIX00）样品测定类型进行测定，测定需 在 2min 内完成，读数仪显示样品中赭曲霉毒素 A 的含量。若读数仪显示“30+”，需将样品稀释后，读 2 DB36/T 1027—2018 数仪设定为“基质 01”（MATRIX01）样品测定类型重新进行测定。稀释方法为：移取 300μL 稀释提取 液于离心管中，加入 1.00mL 稀释缓冲液后混匀，按 7.2.1～7.2.4 重新测定。 8 结果表述 赭曲霉毒素A含量以μg/kg表示，由读数仪直接显示和读取。 9 重复性 在相同测定条件下的两次独立测试结果的绝对差值大于算术平均值20%的情况不超过5%。 3 DB36/T 1027—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 胶体金快速定量检测条性能评价要求 本附录参照GB/T 27404的要求，规定了胶体金定量检测试纸条的技术性能要求，用于对胶体金快速 定量检测类产品的技术性能进行验证，以确认其适用于本方法。 A.1 准确度 采用5μg/kg、10μg/kg和20μg/kg 三个浓度水平的阳性样品，每个浓度水平测定不低于6次，通过 偏差来表达，3个浓度水平的偏差均应控制在-20%～+20%之间。 A.2 精密度 采用5μg/kg浓度水平的实际样品，测定不低于6次，通过批内变异系数来表达，变异系数应≤20%。 A.3 检测限 计算20份阴性样品测定均值加3倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值。 A.4 批间稳定性 采用5μg/kg左右浓度水平的阳性样品，不得低于6个批次，每个批次测定不低于2次，批内测定取平 均值，通过批间变异系数来表达，变异系数应≤25%。 A.5 质控 检测阴性质控和阳性质控以验证检测条性能，购买有标准证书的阴性参考样及阳性参考样进行质 控，可根据参考样的证书上的真实含量水平对检测体系进行质控。 _________________________________ 4