NY/T2550—2014 8.2再现性 采用仪器法测定，在再现性条件下，黄曲霉毒素B含量不大于10.0μg/kg时，两次独立测定结果 的相对相差不得超过30%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μg/kg时，两次独立测定结果的相对相差不得 超过20%。 行业标准信息服务平台 4 NY/T2550—2014 8.2再现性 采用仪器法测定，在再现性条件下，黄曲霉毒素B含量不大于10.0μg/kg时，两次独立测定结果 的相对相差不得超过30%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μg/kg时，两次独立测定结果的相对相差不得 超过20%。 行业标准信息服务平台 4 NY/T 2549—2014 饲料中黄曲霉毒素B，的测定免疫亲和荧光光度法 1范围 本标准规定了免疫亲和荧光光度法测定饲料中黄曲霉毒素B的方法。 本标准适用于饲料及饲料原料中黄曲霉毒素B的测定。 本标准黄曲霉毒素B检出限为0.3μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样中黄曲霉毒素B与免疫亲和柱中固定相上抗体发生特异性结合，其他与抗体不发生免疫亲和 反应的成分随流动相流出，利用甲醇使固定相上抗体变性，将固定相上抗体结合的黄曲霉毒素B洗脱， 荧光定量检测。 4试剂 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水，按照GB/T6682中的要求，二级。 4.2氯化汞（HgCl2）。 4.3硫酸奎宁(C20H26N,OS)。 4.4甲醇(CH;OH)。 4.5浓硫酸(H2SO)。 4.670%甲醇溶液：取70mL甲醇（4.4），加30mL水（4.1)，混匀。 4.7黄曲霉毒素B荧光增强剂：准确称取2.72g氯化汞(4.2),溶于水中，定容至1.0L。 4.81000ng/mL黄曲霉毒素B标准溶液。 4.9100ng/mL黄曲霉毒素B，标准储备液：准确吸取黄曲霉毒素标准溶液（4.8)1mL于10mL容量 瓶中，加甲醇定容。4℃可保存3个月。 警告： 由于黄曲霉毒素毒性很强，试验人员应注意自我保护。操作时，应避免吸入、接触黄曲需毒素标准溶液。标准溶液 配置应在通风橱内进行，工作时应戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触黄曲霉毒素的容器，需浸人10%次氯酸钠 4.10黄曲霉毒素B,标准工作液：分别准确吸取黄曲霉毒素B,标准储备液（4.9)0.00mL、0.01mlL、 0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、3.00mL于10mL容量瓶中，甲醇定容，分别相当于0.0ng/mL、 0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、30.0ng/mL浓度标准工作溶液 4.11黄曲霉毒素B免疫亲和微柱：柱容量≥30ng，AFB免疫亲和柱与其他种类黄曲霉毒素的交叉 反应率均≤10%。 NY/T 2549—-2014 5仪器设备 5.1黄曲霉毒素荧光速测仪或荧光光度计：能在激发波长为（360士5）nm，检测波长为（440土5）nm条 件下测定。 5.2分析天平：感量0.1g。 5.3均质机：转速大于等于20000r/min。 5.4漩涡混合器。 5.5恒温装置：（37.0±2.0)℃。 5.6微量移液器：10μL~100μL,100μL~1000μL。 5.7中速定性滤纸。 5.8玻璃纤维滤纸。 5.9泵流操作架或固相萃取装置。 5.10分样筛：20日。 6分析步骤 6.1试样制备 样品粉碎至全部通过分样筛（5.10），充分混合。 6.2提取 准确称取25.0g试样于烧杯中，加入100.0mL甲醇溶液（4.6），用均质机（5.3）20000r/min提取 2min后，静置1min，中速定性滤纸（5.7）过滤。取10mL滤液，用20mL水稀释，漩涡混合器（5.4）混 匀，经玻璃纤维滤纸（5.8)过滤，备用。 6.3纯化 将黄曲霉毒素B免疫亲和微柱（4.11)与泵流操作架或固相萃取装置（5.9)连接，加人10.0mL纯 水平衡微柱，当微柱中仅余少量液体时，加入10.0mL稀释后的提取液（6.2），流速为1.5mL/min通过 （4.4）于微柱中，流速为1mL/min，抽滤至微柱中液体全部流出，收集全部洗脱液于比色杯（光径为1 cm），加人1.0mL纯水，混匀待测。 6.4标准曲线 将配制好的黄曲霉毒素B，的标准工作液（4.10），在黄曲霉毒素荧光速测仪或荧光光度计（5.1）上， 激发波长360nm、检测波长440nm条件下测量本底荧光值，再加人0.2mL的荧光增强剂（4.7），再次 测量荧光值。将增强后的荧光值与本底荧光值的差值与黄曲霉毒素B标准溶液浓度建立标准曲线。 6.5黄曲霉毒素含量测定 采用黄曲霉毒素荧光速测仪或荧光光度计（5.1)在激发波长360nm、检测波长440nm条件下测定 待测液的荧光值，然后向比色杯中加人黄曲霉毒素B荧光增强剂（4.7)0,2mL混匀后，再次测定其荧 光值，将增强后的荧光值与本底荧光值代人标准曲线，计算得到测定液中黄曲毒素B含量。如样品 中黄曲霉毒素B，含量超过标准曲线范围，则需稀释后再次测量。 7结果计算与表示 试样中黄曲霉毒素B，含量以质量分数X计，数值以微克每千克（μg/kg）表示，按式（1)计算。 X=eXVXn (1) m 式中： 2 NY/T2549—2014 一样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL）； V- n—试样稀释倍数的数值； 一试样质量的数值，单位为克（g）。 m 计算结果保留到小数点后一位。 8精密度 8.1重复性 在重复性条件下，黄曲霉毒素B含量不大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超 过算术平均值的20%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过 算术平均值的15%。 8.2再现性 在再现性条件下，黄曲霉毒素Bl含量不大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超 过算术平均值的30%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μg/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过 算术平均值的20%。 行业标准信息服务平台 3 NY/T2549—2014 一样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL）； V- n—试样稀释倍数的数值； 一试样质量的数值，单位为克（g）。 m 计算结果保留到小数点后一位。 8精密度 8.1重复性 在重复性条件下，黄曲霉毒素B含量不大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超 过算术平均值的20%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过 算术平均值的15%。 8.2再现性 在再现性条件下，黄曲霉毒素Bl含量不大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超 过算术平均值的30%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μg/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过 算术平均值的20%。 行业标准信息服务平台 3 NY/T2549—2014 一样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL）； V- n—试样稀释倍数的数值； 一试样质量的数值，单位为克（g）。 m 计算结果保留到小数点后一位。 8精密度 8.1重复性 在重复性条件下，黄曲霉毒素B含量不大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超 过算术平均值的20%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过 算术平均值的15%。 8.2再现性 在再现性条件下，黄曲霉毒素Bl含量不大于10.0μug/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超 过算术平均值的30%；黄曲霉毒素Bi含量大于10.0μg/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过 算术平均值的20%。 行业标准信息服务平台 3