ICS 11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 537--2002 猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术 Diagnostic techniques for actinobacllus pleuropneumonia 行业标准信息服务平台 2002-08-27发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 537—2002 前言 猪放线杆菌胸膜肺炎（简称APP）又称猪接触性传染性胸膜肺炎（porcinecontagiouspleuropneu- monia）,是猪的一种呼吸系统重要传染病。世界各国均有发生。本病主要引起猪的一种伴有胸膜炎的出 血性坏死性肺炎，多呈最急性或急性病程而迅速致死，可发生于任何年龄的猪只。尤其在集约化养猪场 一旦发生会造成重大经济损失。 国外用于本病的血清学诊断方法有凝集反应、琼脂扩散、间接血凝、补体结合（CF)以及酶联免疫吸 附试验(ELISA)等。而最常应用的血清学诊断方法是CF和ELISA试验。细菌的鉴定除用常规方法外， 也有用聚合酶链反应(PCR)方法诊断。型的鉴定常规方法有琼脂扩散和间接血凝等试验方法，近来亦有 应用核糖核酸分型的试验报道。 本标准的附录 A、附录 B、附录 C、附录 D、附录 E、附录 F、附录 G、附录H均为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部动物检疫所。 本标准主要起草人：朱士盛、杜文金、徐瑞、王新。 行业标准信息服务平 NY/T 537—2002 猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术 1 范围 本标准规定了猪放线杆菌胸膜肺炎的诊断技术。 本标准酶联免疫吸附试验用于筛选试验，包括产地检疫、流行病学调查和无本病健康猪群的建立。 补体结合试验适用于口岸进口猪检疫。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB4789.28-1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 3病原学检查 3.1材料准备 3.1.1培养基 3.1.1.1营养琼脂：按GB4789.28—1994中4.7规定配制。 3.1.1.2血琼脂：按GB4789.28-—1994中4.6规定配制，其中4.6.1成分用4.7.1成分代替。 3.1.1.3尿素琼脂：按GB4789.28—1994中3.15规定配制。 3.1.1.4巧克力琼脂：制备方法见附录A。 3.1.1.5类胸膜肺炎微生物(PPLO)琼脂：制备方法见附录A。 3.1.2其他材料 3.1.2.1灭菌棉拭子。 3.1.2.2革兰氏染色液：按GB4789.28-1994中2.2规定制备和染色。 3.1.2.3糖发酵管：按GB4789.28—1994中3.2规定制备，3.2.1成分中蛋白陈改为多聚蛋白陈，pH 调至7.2，另外，按0.5%加人糖的同时，按0.01%加入辅酶A后，分装于有倒置小管的试管内， 68.94kPa（115℃蒸汽）灭菌15min。 3.1.2.4鸡表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌。 3.2病料采集 3.2.1活体病料采集：用棉子伸人鼻腔采集分泌物，放人无菌试管中立即送往实验室供分离。 3.2.2死后病料采集：无菌采集具有典型病变的肺气管、肺门淋巴结、鼻腔分泌物，在最急性感染死亡 的小猪，除采集上述病料外，还可取肝、脾病料。 3.2.3样品运送：采集的样品，应在4℃条件下24h内送到实验室。 3.3病原分离 将样品按常规分离要求直接接种到血琼脂（见3.1.1.2)表面，再用鸡表皮葡萄球菌作交叉划线，于 37℃含5%～10%二氧化碳(CO,）下培养。继代培养用巧克力琼脂（见第A.1章）和PPLO琼脂（见第 A.2章)。 1