ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1187-2006 鸡传染性贫血病毒聚合酶链反应试验方法 Polymerase chain reaction for chicken infectious anemia virus 行业标准信息服务平台 2006-07-10 发布 2006-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 1187—2006 前言 鸡传染性贫血（Chicken Infectious Anemia）是由鸡传染性贫血病毒（Chicken Infectious Anemia Virus)引起的一种传染病,主要损害鸡的造血和淋巴器官,引起雏鸡再生障碍性贫血和全身淋巴组织萎 缩,导致免疫功能抑制，已成为危害养鸡业的重要疫病之一。 本标准附录A为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准主要起草人：田克恭、王宏伟、孙明、王传彬、陈西钊。 行业标准信息服务平台 I NY/T 11872006 鸡传染性贫血病毒聚合酶链反应试验方法 1范围 本标准规定了鸡传染性贫血病毒(CAV)聚合酶链反应(PCR)的技术要求。 本标准适用于鸡血清和组织中的鸡传染性贫血病毒检测。 2 试剂 2.1消化液(见附录A.1) 2.22%蛋白酶K溶液 2.3酚/氯仿/异戊醇混合液（见附录A.2） 2.4 2.5 mmol/LdNTP 2.58mmol/L上下游引物混合液(引物序列见附录A.3) 2.60.5U/μL TaqDNA聚合酶 2.710×PCR缓冲液 2.81%溴化乙锭(EB)溶液 2.9TAE电泳缓冲液 2.10 01%琼脂糖凝胶 2.11上样缓冲液(见附录A.4) 2.12其他试剂：异丙醇（分析纯）、100bpMarker、75%乙醇溶液、15mmoL/L氯化镁溶液、灭菌双蒸 水。 3实验室条件 3.1实验室必须为生物安全ⅡI级(BSL-2级)以上实验室。 3.2实验室分区：PCR试验区域分PCR反应液配制区一配液区、模板提取区、扩增区、电泳区；流程顺 序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。 3.3实验室应配备的仪器及耗材 3.3.1仪器：分析天平、高速离心机、真空干燥器、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫 外分析仪）、液氮罐或一70℃冰箱、微波炉、组织研磨器、一20℃冰箱、水浴锅、可调移液器（最大量程为 2 μL20 μL200 μL、1000 μL)。 3.3.2耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、10mL一次性注射器、1.5mL灭菌离心管、0.2mL薄壁PCR管、 琼脂糖、500mL量筒、500mL锥形瓶、吸头(10μuL、200μL、1000μL)、灭菌双蒸水。 4操作程序 4.1样品的采集与处理 4.1.1样品的采集：濒死鸡、扑杀鸡取肝脏;待检活鸡,用注射器取血2 mL～4mL,立即送往实验室。 4.1.2样品的处理：每份样品分别处理。 4.1.2.1组织样品处理：取待检病料约0.2g置研磨器中剪碎并研磨,加入2mL消化液继续研磨。取 已研磨好的待检病料上清200μL,置1.5mL灭菌离心管中,再加入400μL消化液和10μL蛋白酶K溶 1